产品清单
货号 | 名称 | Ex/Em (nm) | 规格 |
90-2501 | AF 350 WGA | 346/445 | 1mg |
90-2502 | AF 405 WGA | 400/424 | 1mg |
90-2503 | AF 430 WGA | 430/545 | 1mg |
90-2504 | AF 488 WGA | 494/517 | 1mg |
90-2505 | AF 532 WGA | 530/555 | 1mg |
90-2506 | AF 546 WGA | 554/570 | 1mg |
90-2507 | AF 555WGA | 555/572 | 1mg |
90-2508 | AF 568 WGA | 578/602 | 1mg |
90-2509 | AF 594 WGA | 590/617 | 1mg |
90-2510 | AF 647 WGA | 651/672 | 1mg |
90-2511 | AF 660WGA | 668/698 | 1mg |
90-2512 | AF 680 WGA | 684/707 | 1mg |
90-2513 | AF 700 WGA | 702/723 | 1mg |
29028 | CF405M WGA | 408/452 | 1mg |
29022 | CF488A WGA | 490/516 | 1mg |
29077 | CF568 WGA | 562/584 | 1mg |
29023 | CF594 WGA | 593/615 | 1mg |
29024 | CF633 WGA | 629/650 | 1mg |
29026 | CF640R WGA | 642/663 | 1mg |
29029 | CF680 WGA | 681/698 | 1mg |
90-2514 | Cy3 WGA | 555/565 | 1mg |
90-2515 | Cy5 WGA | 650/665 | 1mg |
90-2516 | Cy5.5 WGA | 681/698 | 1mg |
90-2517 | Cy7 WGA | 755/777 | 1mg |
90-2518 | HRP WGA | N/A | 1mg |
90-2519 | Biotin WGA | N/A | 1mg |
90-2520 | Rhodamine WGA | 550/575 | 1mg |
90-2521 | Fluorescein WGA | 495/515 | 1mg |
90-2522 | PerCP-WGA | N/A | 1mg |
90-2523 | CF405L WGA | 395/545 | 1mg |
* In PBS, pH 7.4
存储和处理
4°C避光保存。如按建议储存，产品自收到之日起至少稳定12个月。
产品描述
小麦胚芽凝集素（WGA）选择性结合N-乙酰葡糖胺和唾液酸残或用于蛋白印迹。WGA也可用作逆行或顺行神经元示踪剂。WGA偶联
物染色可能取决于组织类型和细胞类型。WGA还标记革兰氏阳性细菌和酵母芽痕。
与其他荧光染料相比，凯新的下一代荧光CF染料在亮度和光稳定性方面具有优势。我们还提供 HRP WGA，可与比色HRP底物或荧光酪胺
底物一起使用。
实验方案
WGA偶联物复溶
为了制备1mg/mL储备溶液，将1mg冻干的WGA结合物溶于1mL水中。冻干产物中含有足够的PBS，重溶后为1X PBS的浓度。储备溶液可以在2-8°C下储存长达一周，或者以等分试样在-20°C下储存12个月或更长时间。可以添加叠氮化钠以防止长期储存期间的细菌污染，但是，不要将叠氮化物与HRP结合物一起使用。保护荧光偶联物免受光照。
细胞染色的推荐解决方案
1. 细菌细胞：
0.15 M NaCl 或者3 M KCl.
2. 酵母细胞：
Synthetic defined complete (SDC)培养基，或不含酚红的 Hank’sbalanced salt solution (HBSS)。由于自发荧光，不建议使用YPD培养
基。
3. 哺乳动物细胞：
对于固定细胞，可以使用不含酚红的PBS或Hank’s balanced saltsolution (HBSS)。对于活的贴壁细胞，建议使用含钙和镁的HBSS，因为它可以维持细胞形态。我们还在全血清培养基中进行了染色，结果良好。
活细胞和固定细胞染色方案
这些是使用 WGA 偶联物对细胞进行染色的一般方案。 可能需要针对您感兴趣的组织或细胞进行优化。 虽然 WGA 通常用于组织染色，但其定位高度依赖于组织，因此它可能不会染色目标组织中的细胞边界。
需要但未提供的材料
•多聚甲醛，在4%PBS中。
•透化缓冲液。
1.染色活细胞
1.1 用推荐的缓冲液清洗细胞2次。
1.2 在推荐的缓冲液中制备WGA的染色溶液。染色浓度可能需要优化。细菌和酵母细胞的推荐起始浓度为50-100 ug/mL，哺乳动物细胞的推荐起始浓度为1-5 ug/mL。
1.3 用WGA染色溶液孵育细胞，避光，室温下细菌细胞10-30分钟，室温下哺乳动物细胞10分钟。
注意：随着孵育时间的延长，哺乳动物细胞中可能会观察到细胞内染色增加。
1.4 用与染色相同的缓冲液或培养基洗涤细胞2次。
注意：
- 建议在固定前用HBSS或PBS等缓冲液清洗；如果在固定和透化过程中存在游离WGA，WGA将同时染色细胞表面和分泌途径中的细胞器。WGA染色兼容多聚甲醛(PFA)和溶剂固定。
- 对于活细胞成像，如果活细胞通过共聚焦成像，洗涤可能是可选的，因为如果您专注于细胞，溶液中的游离WGA可能不会干扰成像。对于荧光显微镜，强烈建议洗涤，因为游离WGA可导致高背景。
1.5 使用适当的滤光片组在显微镜上成像细胞（有关峰值激发和发射，请参见产品表）。染色也可以通过流式细胞术在适当的检测通道中检测。
图一：CF488A WGA 染色的活HeLa细胞（已透化）
2.染色固定细胞
WGA染色与多聚甲醛（PFA）固定、溶剂固定或FFPE组织染色兼容。然而，与PFA相比，使用酒精或溶剂固定剂（如甲醇或丙酮）会引起更多的细胞内染色。染色前细胞的透化也将导致WGA标记质膜和细胞内区室（例如高尔基体结构）中的糖蛋白。因此，对于细胞表面标记，我们建议在透化之前使用PFA固定和WGA染色。
2.1 从细胞培养基中取出活细胞，用HBSS，PBS或类似缓冲液冲洗3次。
2.2 在室温下用 4% PFA 的 PBS 溶液固定细胞 20 分钟。
注意：避免将细胞固定超过20分钟，因为这可能导致细胞内染色增加。其他固定条件（例如用2%PFA固定或在4°C固定）可能是保持细胞类型膜完整性的最佳选择。
2.3 用PBS洗涤细胞3次。
2.4 在室温下用CF染料WGA给细胞染色10-30分钟并避光。推荐的起始浓度为1-5ug/mL。
2.5 用PBS洗涤细胞3次。
2.6 用含有0.1%Triton X-100的PBS的在室温下透化细胞30分钟并避光。
2.7 用PBS洗涤细胞3次。
2.8 进行免疫荧光染色。
注意：如果可能的话，我们建议在随后的封闭和洗涤步骤中省略洗涤剂，以尽量减少WGA共轭信号的潜在重新分布或损失.
2.9 使用适当的滤光片组在显微镜上成像细胞（有关峰值激发和发射，请参见产品表）。
石蜡切片染色的推荐解决方案
1. 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯 I 15min---二甲苯Ⅱ15min---无水乙醇I 5min---无水乙醇Ⅱ5min---85%酒精
5min---75%酒精5min---蒸馏水洗。
2. 抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8min至沸，停火8min，再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3. 染色：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走)，在圈内滴加稀释好的 WGA 染液（推荐浓度为100ug/mL，可能需要优化），避光恒温箱37°孵育30min。
4. DAPI复染细胞核：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
5. 淬灭组织自发荧光:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。
6. 封片：切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7. 镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（有关峰值激发和发射，请参见产品表）。
图二：CF®488A WGA和DAPI染色的心肌组织切片
