说明书-CF-CholeraToxinSubunitB（CTB）

CTB 产品信息

                     Cholera Toxin Subunit B 偶联物

储存和处理

冻干粉在 -20℃避光的条件下可稳定保存至少 6 个月（自收货之日起）。

产品描述

霍乱毒素是在感染霍乱时由霍乱弧菌产生的引起症状的毒素。霍乱毒素由 1 个A 亚基和 5 个 B 亚基组成 ，其中，A 亚基是有毒性的酶亚基；B 亚基是无毒的受体结合亚基 ，可用于细胞生物学研究。本产品中所有偶联物使用的 CTB 均是由大肠杆菌重组生产的 ，完全不含有毒的 A 亚基。

References

1) pang, H. et aI. (2004). J. CeII Sci 117, 1421-1430.

CTB 偶联物

目前 CTB 已被用作神经元示踪剂 ，并且还被证明可以与哺乳动物细胞表面脂筏中的 GM1 神经节苷脂结合。 因此 ，荧光标记的CTB 偶联物已被用作活体实时成像或固定细胞上的脂筏标记物和内吞示踪剂。 值得注意的是 ，CTB 染色可显示 HeLa 细胞等培养细胞的异质性 (1)。

新研博美的CTB 偶联物使用我们精选的 CF染料、AF染料以及其他常用标记物进行标记。其中 ，CF染料是新研博美开发的一系列二代荧光染料 ，与其他荧光染料相比 ，在亮度、光稳定性和水溶性方面具有综合优势。

实验方法

以下是在培养细胞中标记 GM1 神经节苷脂阳性脂筏的方法。 对于神经元示踪研究 ，请参阅主要文献以找到适合的应用方案。

需要但未提供的材料

• 磷酸盐缓冲盐水(PBS)

• 牛血清白蛋白 (BSA)

• Hank’s 平衡盐溶液(HBSS)(HBSS)

• 4% 多聚甲醛的 PBS 溶液

• Hoechst 染料（可选）

复溶

在 1X PBS 中将 CTB 偶联物复溶至 1 mg/ml 的浓度。 如果与您的下游应用兼容，可以添加终浓度 2 mM 的叠氮化钠置于 4 ℃ 储存。

储备溶液可以用水或 PBS 制备。 溶液可以按需分装并在 -20°C避光条件下保存最多六个月，或在 4°C下保存最多三个月。

活细胞表面标记

1. 用预冷的 1X HBSS+0.5% BSA 洗涤细胞一次。

2. 使用预冷的1X HBSS+0.5%BSA 稀释 CTB 偶联物至终浓度为400 ng/mL ~ 1 ug/mL。

3. 吸出洗涤细胞的缓冲液，换入含有稀释共轭物的缓冲液。将细胞在 4 ℃ 下避光孵育 30 分钟。

4. 使用预冷的 1X HBSS+0.5% BSA 洗涤细胞三次。

5. 在 4 ℃ 条件下，将细胞在含有 4% 多聚甲醛的 1X PBS 中避光孵育 15 分钟固定细胞。

    注：1 ug/mL 的 Hoechst 或类似的染色剂可作为核复染剂。如果细胞将被渗透用于其他免疫染色，抗 CTB 的抗体可能有助于优化脂筏结构域的保存，应在渗透前与细胞一起孵育。

6. 用 1X PBS 洗涤细胞两次，并处理样品以进行成像或后续的免疫染色。

膜囊泡运输分析

1. 直接在细胞培养基中添加 CTB 偶联物储存溶液，稀释至偶联物终浓度为 400 ng/mL ~ 1 ug/mL。

2. 37 ℃ 避光孵育 10 分钟至 1 小时或更久。

    注：在 CTB 偶联物孵育过夜后，我们没有在 HeLa 细胞中观察到细胞毒性。

3. 用 HBSS 洗涤细胞两次。室温下，在含有4% 多聚甲醛的 1X PBS 中避光孵育 15 分钟固定细胞。

4. 用 1X PBS 洗涤细胞两次，并处理样本进行成像或后续的免疫染色。

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