AF647 NHS 酯（Alexa Fluor 647 NHS Ester）试剂参数总结

发布时间：

2023-07-12

来源：

http://www.xinyanbm.com/

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一、产品介绍：

AF647 NHS酯（琥珀酰亚胺酯）与Alexa Fluor 647NHS酯相同。它是一种明亮的远红色荧光染料。AF647的NHS酯（或琥珀酰亚胺基酯）是方便的胺反应形式，用于将该染料与蛋白质或抗体结合。

AF647染料是水溶性的并且pH从pH4到pH10不敏感，用于抗体、肽、蛋白质、修饰寡核苷酸和其他含胺分子的细胞可视化和标记。

AF 647 NHS酯染料具有高的水溶性和高的荧光量子产率，它在宽的摩尔范围内对pH不敏感。广泛应用于成像和流式细胞术。

Alexa Fluor 647染料分子可以以高摩尔比附着在蛋白质上，而不会产生显著的自猝灭，从而产生更明亮的偶联物和更灵敏的检测。

二、产品参数：

1.产品基本信息

产品名称：AF647 NHS ，Alexa Fluor 647NHS

分子量：1259.66

储存条件：保存在冰箱-15℃干燥

保质期：12个月

存储条件：在零下15度以下保存, 避免光照

2.产品物理化学光谱特性：

激发波长(nm)：651

发射波长(nm)：672

荧光基团标记：Alexa Fluor™ 647 染料
反应性基团：NHS 酯
反应性：蛋白和配体、胺修饰的寡核苷酸上的伯胺
偶联物的 Ex/Em：651/672 nm
消光系数：270,000 cm-1M-1
光谱类似染料：Cy5™

3.AF 647活性酯结构式：

AF647-NHS

AF 647的吸收和发射光谱：

AF647-NHS

三、Alexa Fluor™ NHS 酯可参与相关实验抗体标记

1.典型偶联反应
您可以将胺反应性试剂与几乎任何蛋白或肽偶联（提供的方案针对 IgG 抗体进行了优化）。您可以针对任何量的蛋白按比例缩放反应，但为了获得不错的结果，蛋白的浓度应至少为 2 mg/mL。我们建议使用三种不同的反应性试剂/蛋白摩尔比进行三种不同程度的标记。
Alexa Fluor™ NHS 酯通常溶于高质量的无水二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲亚砜 (DMSO) (D12345) 中，并在 0.1–0.2 M 碳酸氢钠缓冲液（pH 值 8.3）中于室温下进行反应，持续 1 小时。由于末端胺的 pKa 低于赖氨酸 ε-氨基基团的 pKa，您可以使用接近中性 pH 值的缓冲液对胺末端进行更具选择性的标记。
2.偶联物纯化
通常使用凝胶过滤柱（如 Sephadex™ G-25、BioGel™ P-30 或等效柱）将标记抗体与游离 Alexa Fluor™ 染料分离。对于更大或更小的蛋白，选择具有适当分子量滤除点的凝胶过滤介质或通过透析纯化。