Mag-Fluo-4 acetoxymethyl ester, cell permeant镁离子荧光探针Mag-Fluo-4 AM的使用方法

产品描述

具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM的一种结构类似物，对镁离子（Mg2+）和钙离子（Ca2+）的Kd值分别是4.7mM和22µM，是一种常用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。

产品优势

1）镁离子指示探针

Mag-Fluo-4与Magnesium Green indicator相比，具更加灵敏的Mg2+荧光反应。由于细胞内Mg2+的生理波动幅度通常很小，这一点点灵敏度的提高都是值得考虑的优势。与Fluo-4一样，Mag-Fluo-4在不含二价阳离子的情况下基本无荧光，一旦与Mg2+结合后，呈明显的荧光加强，但无光谱迁移（见下图）。

图. Mag-Fluo-4在0-50mM Mg2+溶液内的荧光发射光谱

2）钙离子指示探针

Mag-Fluo-4是Fluo-4的类似物，具有更低钙离子结合亲和性，特别适合用于检测1 µM~1 mM范围内的胞内钙离子水平。

产品特性

1） 同义名：Mag-Fluo-4 acetoxymethyl ester, cell permeant

2） 分子式：C37H33F2NO18

3） 分子量：817.65 g/mol

4） 外观：橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于DMSO

8） 化学结构式：

注意事项

1） 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μg Mag-Fluo-4 AM（Mw：817.65 g/mol）溶于12μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

2. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Zheng JM et al. MagT1 regulated the odontogenic differentiation of BMMSCs induced byTGC-CM via ERK signaling pathway. Stem Cell Res Ther. 2019 Jan 31;10(1):48.

使用方法（细胞内镁离子水平的流式检测）：

1）用生理培养液（120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose）于37℃预孵育BMMSCs细胞10min使其达到离子梯度的稳定和平衡；

2）用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM储存液1mM；

3）取4ul Mag-Fluo-4-AM储存液（1mM）和5ul 20% F-127，加入1ml培养基内，充分混匀；

4）取0.25ml 分散液加入0.75ml含细胞培养液，使得探针终浓度为1uM；继续孵育30min，之后清洗细胞3次，之后再孵育30min保证细胞内AM基团的去酯化；

5）之后用流式细胞仪分析荧光强度（Ex/em:480/520nm）。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

 

文献二、Ainbinder A et al. Role of Mitofusin-2 in Mitochondrial Localization and Calcium Uptake in Skeletal Muscle. Cell Calcium. 2015 Jan;57(1):14-24.
使用方法(肌浆钙离子的mag-fluo-4光度测定) :趾短屈肌( FDB )肌肉纤维用Mag-Fluo-4-AM ( 4 μM )室温加载20min ,之后用加含25 μM BTS的无探针溶液清洗20min。之后对纤维进行电刺激,用-系列抽搐刺激( 1 ms pulse at 2 Hz )或5个连续性的强直电刺激。mag-fluo 4用480+ 15nm激发和535士30nm发射检测。

Fig 2. Measurement of mitochondrial Ca2+ uptake during twitch stimulation in mt- pericam expressing CTRL and Mfn2 KD FDB fibers.
A. Average (+SE) traces of mt-pericam fluorescence (402 nm excitation/515 nm emission) in CTRL (black circles) and Mfn2 KD (white circles) fibers during twitch stimulatioFig 2.
B. Average (+SE) relative change in mt- pericam fluorescence (OF/F) in CTRL and Mfn2 KD FDB fibers during twitch stimulation. 
C. Representative mag-fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers. 
D. Average (+SE) relative change in myoplasmic mag-fluo-4 fluorescence during twitch stimulation of CTRL or Mfn2 KD FDB fibers.fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers.

 

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