Alexa Fluor（AF）系列荧光染料的优点及应用
发布时间：
2023-03-31
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http://www.xinyanbm.com/
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什么是AF染料：
Alexa Fluor 染料是罗丹明或香豆素等染料的衍生物，磺酸酯基团的引入使得Alexa染料呈负电性和亲水性，具有更好的光学稳定性、发光强度以及pH的适应性，可应用于生物研究中对组织、细胞和生物分子的标记和定位等。Alexa Fluor系列染料激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域，根据激发光最大波长(nm)的不同，Alexa Fluor被命名为不同的染料类型，AF可替代的染料具体如下表所示：
Alexa Fluor染料的优点：
亮度 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料荧光更强。
光稳定性 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料光稳定性更强，提供更长的图像捕获时间。
仪器兼容性 — Alexa Fluor 偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要输出波长相匹配。
多种颜色 — Alexa Fluor 偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光.
pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一个广泛的pH 范围内保持强荧光.
水溶性 — Alexa Fluor 反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即可结合蛋白, 且储存不易产生沉淀.
Alexa Fluor 488：Alexa Fluor 488的发射光谱与FITC几乎一致，经激光激发后发出绿色荧光，最大发射波长为519 nm，但其荧光强度和稳定性要优于FITC，且在pH 4-10范围内能保持较好的光稳定性。
Alexa Fluor 555：Alexa Fluor 555的荧光光谱和Cy3非常接近，最大发射波长565nm,荧光更强，稳定性更好，可耐受更长的荧光信号捕捉时间。
Alexa Fluor 647：Alexa Fluor 647是一种明亮的红色荧光染料，其最大发射波长为668 nm，一般在流式细胞仪的FL4通道检测。Alexa Fluor 647具有荧光量子产率高、光稳定性好、pH耐受范围广和荧光不易淬灭等特点，是APC和Cy5的优质替代品。
AF染料部分结构式：
AF染料的应用：
由于Alexa Fluor染料的特色优势，可将其标记靶点蛋白后用于细胞治疗药物开发的多个场景，如使用Alexa Fluor标记蛋白流式检测CAR-T细胞阳性率、PK 研究，通过IHC技术在组织水平下检测CAR-T药物的浸润分布情况等，是细胞治疗药物开发过程中不可或缺的重要试剂，高质量的Alexa Fluor标记蛋白对CAR-T细胞治疗药物的产品质量至关重要。在常规工艺下，可利用常规的琥珀酰酯( NHS) 化学反应，将Alexa Fluor 染料与蛋白质的氨基基团( —NH2，包括赖氨酸侧链氨基和蛋白末端氨基) 连接，共价结合形成一个稳定的琥珀酰亚胺酯结构，来完成蛋白质的Alexa Fluor 标记，但由于不同蛋白质氨基酸序列长度及蛋白质表面赖氨酸数目的差异，同样的荧光标记工艺对不同靶点蛋白的活性影响程度，及相同蛋白质的不同生产批次的影响程度也有着较大的差异。因此，采用定点技术将染料对蛋白进行标记，是开发高质量Alexa Fluor荧光标记蛋白的关键。
AF染料光谱图：
AF染料产品列表：
AF 647 Acid，Alexa Fluor 647 COOH
AF 647 alkyne，Alexa Fluor 647 alkyne
AF 647 azide，Alexa Fluor 647 N3
AF 647 amine，Alexa Fluor 647 NH2
AF 647 NHS ester，Alexa Fluor 647 NHS
AF 647 Maleimide，Alexa Fluor 647 Mal
AF 647 DBCO，Alexa Fluor 647 DBCO
AF 647 Me-Tetrazine，Alexa Fluor 647 Me-Tetrazine
AF488 azide，Alexa Fluor488 N3
AF488 carboxylic acid，Alexa Fluor488 COOH
AF488 NHS ester，Alexa Fluor488 NHS
AF430 alkyne，Alexa Fluor430 alkyne
AF430 amine，Alexa Fluor430 NH2
AF430 azide，Alexa Fluor430 N3
AF430 carboxylic acid，Alexa Fluor430 COOH
AF430 maleimide，Alexa Fluor430 Mal
AF430 NHS ester，Alexa Fluor430 NHS
AF430 tetrazine，Alexa Fluor430 tetrazine
AF568 alkyne, 5-isomer
AF568 azide, 6-isomer
AF568 carboxylic acid
AF568 NHS ester
AF594 NHS ester, 5-isomer
AF488 alkyne, 5-isomer
AF488 DBCO, 5-isomer
AF488 C5 Maleimide