SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项

SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针

一、产品描述
SBFI，英文全名Sodium-binding Benzofuran Isophthalate，一种Na+选择性荧光指示剂，可用来预测纯化线粒体Na+梯度，检测胞内Na +水平，测定细胞Na+外流，以及与其他荧光指示剂联合使用以分析Na+与Ca2+和Mg2+浓度、胞内pH和膜电位变化的相关性。虽然SBFI对Na+的选择能力弱于Ca2+指示剂比如Fura-2，但在其他单价阳离子存在体系，SBFI足以检测Na+的生理浓度。结合离子后的SBFI光谱反应可通 过激发光比率测定来判定，其能与用相同光滤片和仪器检测的探针Fura-2共同使用。当体系内含生理浓度的K+/Na+（~135mM），SBFI对Na+的解离常数（Kd）为11.3mM；而不存在K+体系，对Na+的Kd为3.8mM。SBFI 对Na+的选择性比K+约强18倍。
本品为乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester, AM ester）形式的SBFI，CAS NO：129423-53-6，具有细胞膜渗透性，只需简单孵育即可进 入细胞，常用加载浓度范围5-10µM，加载时间40min-4h，根据具体的实验要求和细胞类型来调整。
二、产品特性
1）化学名：4,4’-[1,4,10-trioxa-7,13-diazacyclopentadecane-7,13-diylbis(5-methoxy-6,2-benzofurandiyl)]bis-1,3- benzenedicarbox ylic acid 1,1’,3,3’-tetrakis[(acetyloxy)methyl] ester
2）同义名：Sodium-binding Benzofuran Isophthalate Acetoxymethyl ester
3）CAS NO：129423-53-6
4）分子式：C56H58N2O23
5）分子量：1127.07
6）纯度：＞90%（HPLC）
7）Ex/Em：340,380/500 nm
8）外观：浅黄至暗黄至暗橙固体或油状
9）溶解性：溶于DMSO（10mM）
10）化学结构式：

三、保存与运输方法
保存：-20℃避光干燥稳定冻存二年。 运输：冰袋运输。
四、注意事项
1）SBFI AM易受潮，粉末需要干燥保存；需用无水DMSO溶解，配制储存液（如10mM），置于-20℃干燥避光，小量分装避免反复冻融，至 少3个月稳定。
2）由于SBFI AM水溶性较差，可在实验前与等体积Pluronic F-127（25% w/v）混合，以提高探针加载效率。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
五、SBFIAM（Na+ Indicator）使用和注意事项
以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。
1）配置1-10mM SBFI AM储存液∶比如，实验前取一管50ug SBFI AM置于室温回温至少20min，低速离心后，往管内加入8.8723ul无水DMSO使其充分溶解后，制备成5mM储存液。若单次用不完，需分装冻存。
2)准备25%（w/v）Pluronic F-127∶100mg Pluronic F-127粉末中加入 400μl DMSO，配制成25%（w/v）DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。【也可配置成其他浓度Pluronic F-127，只需保证最终工作体系内 Pluronic F-127<0.1%（w/v）】。
3)于正式实验前，将 SBFI AM 储存液于等体积25%（wv）Pluronic F-127混匀。【注意∶SBFIAM水溶性差，必须借助 Pluronic F-127来促进其分散进入水溶性加载缓冲液。两者只能在实验前混匀，不能保存待用】。
4)将上述混合液加入适量细胞加载缓冲液（如生理缓冲液PBS，无血清细胞培养基等）达到所需的工作浓度，加入细胞内进行探针标记。孵育温度可以是室温或37℃，孵育浓度通常为5-10μM，时间40min-4h，具体的孵育浓度和时间请参考相关的文献资料。
5)孵育结束，再加入不含探针的细胞加载缓冲液额外孵育 20-60min，以保证细胞将 SBFI AM完全酯酶化。
6）最后用生理缓冲液或无血清培养基清洗细胞至少一次，以降低胞外背景荧光。
7)用合适的仪器检测荧光信号，分别收集激发波长 340nm，380nm，发射波长500nm（发射波长范围450-550nm，根据你的实际荧光信号看看最大波长吸收峰大概在哪个位置）。根据双激发波长收集荧光信号的比值来确定离子浓度。
【注意事项】∶
1）如果细胞加载缓冲液是以碳酸氢钠为缓冲体系，那么加载需要含5%CO2的环境内进行，以防止因CO2损失引起的缓冲液碱化。
2）如果细胞加载缓冲液含血清，那需适当提高 AM探针工作浓度，以补偿因 AM探针与血清蛋白结合引起的损失。
3）某些情况下，对分子量接近或超过1000的 AM探针，需用不含 AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育 20-60min，以保证细胞内酯酶能充分降解 AM基团。
4)探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异，请使用前参考相应的文献资料来设计和摸索最佳条件。
5)探针的细胞 Kd值与溶液 Kd值有差异，SBFI的胞内Kd值可用通道形成抗生素如gramicidin来校准（calibration）。根据具体实验要求来决定是否做这一步。
可查阅文献∶a）Negulescu PA et al. Intracellular ion activities and membrane transport in parietal cells measured with fluorescent dyes. Methods Enzymol. 1990;192:38-81.
b)Harootunian et al,Ratio imaging using a newly developed Fluorescent sodium indicator in rat fibroblasts. FASEBJ2:A728(1988).
c)Harootunian et al. Fluorescent ratio imaging of cytosolic free Na+ in fibroblasts and lymphocytes Journal of Biological Chemistry 1989.