359010-70-1；Aminophenyl fluorescein；APF；3'-(p-aminophenyl) fluorescein

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中文名称：氨基苯基荧光素
英文名称：Aminophenyl fluorescein；APF；3'-(p-aminophenyl) fluorescein
CAS号：359010-70-1

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- 商品名称: 359010-70-1；Aminophenyl fluorescein；APF；3'-(p-aminophenyl) fluorescein
- CAS号: 359010-70-1
- 产品货号: Y-R-4418
中文名称：氨基苯基荧光素<br>英文名称：Aminophenyl fluorescein；APF；3'-(p-aminophenyl) fluorescein<br>CAS号：359010-70-1

APF是一种活性氧(Reactive oxygen species,ROS)指示剂，比H2DCFDA(DCFH-DA,DCFH)具更优秀的特异性和稳定性。APF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氢酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em，~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。

使用方法
一、储存液制备
将低温保存的1mg粉末置于室温回温至少20min，之后加入472μl无水DMF配置成5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20°C避光干燥保存，避免反复冻融。
【注】：APF能溶于DMSO（1OmM），但有数据显示DMSO是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。因此，建议用DMF作为溶剂。
二、溶液体系检测
正式实验前，取一管HPF储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS缓冲液，PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。
三、细胞体系检测
以下实验步骤仅做参考，最佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入APF工作液之前按需处理细跑。
1）根据具体用量，将DMF储存液用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液稀释成1-10μM工作液。
2）根据实验设计处理细胞(比如，RASM细胞用50-100nM血管紧张素I处理3-5h）。
3）取步骤1）准备的1-10μM工作液加入细胞，37°C孵育20-60min。
4）吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理缓冲液替换。
5）用合适的荧光仪器(Ex/Em=492/515nm）来检测。
【注1】：BSA和酚红会影响荧光，需谨慎使用。
【注2】：APF能用于溶液体系或胞内ROS检测。
- 产品参数1
  - Catalog #: Y-R-4418
  - Name: Aminophenyl fluorescein；APF；3'-(p-aminophenyl) fluorescein
  - CAS: 359010-70-1
  - Formula: C26H17NO5
  - MW: 423.4
  - Purity: 95%
  - Availability: In Stock
  - Ships within: 24 hours
  - Storage condition: -20°C
  - Shipping: Ambient temperature