说明书-CF® 染料标记人转铁蛋白（human transferrin）偶联物

产品说明

CF® 荧光染料标记人转铁蛋白偶联物

规格: 1 mg

储存与处理

产品到达后请储存于-20°C，并避光保存。按照推荐条件储存，冻干产品自收货之日起至少可稳定保存六个月。

使用磷酸盐缓冲液（PBS）进行复溶，并加入叠氮钠至最终浓度为2 mM，然后于4°C保存。使用前请通过短暂离心去除沉淀的聚集体。本产品含有人全铁转铁蛋白，并已检测呈HIV和HBsAg阴性，但仍应视为含有潜在感染性物质。请按照通用实验室安全预防措施处理和使用本产品，并妥善处理废弃物。

产品描述

转铁蛋白是一种铁结合糖蛋白，通过与其受体结合（在全铁形式下）将铁输送到细胞中。该复合物随后通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞内。包括内体pH和氧化还原酶活性在内的多种因素可使铁从转铁蛋白中释放。随后，无铁转铁蛋白（apo-transferrin）通过内吞回收途径与转铁蛋白受体一起回收至细胞表面并释放，以结合更多铁。

标记的人全铁转铁蛋白用于内体途径或转铁蛋白摄取的显微研究。凯新生物的全铁转铁蛋白偶联物采用CF®染料进行标记，这是一种新型荧光染料，在亮度、光稳定性和水溶性方面相较于其他染料（如Alexa Fluor®、DyLight®、Cy®染料或IRDyes®）具有综合优势。

实验方案

以下是标记哺乳动物细胞转铁蛋白受体的方案：

1. 将CF®染料标记的人转铁蛋白用1X PBS 复溶至浓度为1 mg/mL。
2. 标记前将细胞饥饿处理一小时。然后，用含0.1%牛血清白蛋白（BSA）的冷PBS洗涤细胞。
3. 加入最终浓度为25 ug/mL的CF®染料标记的人转铁蛋白（溶于含0.1% BSA的冷PBS中）。
4. 于4°C避光孵育细胞90分钟。用含0.1% BSA的冷PBS洗涤细胞三次。
5. 根据您的实验目的，按照以下方案操作：
   • 对于表面染色：立即用1X PBS中的4%多聚甲醛在室温下（避光）固定细胞15分钟。
   • 对于转运测定：向细胞中加入温热的完全细胞培养基，并在37°C避光孵育5分钟至1小时。在1X PBS中的4%多聚甲醛固定细胞前，用含0.1% BSA的冷PBS洗涤细胞三次，然后在室温下（避光）固定15分钟。
6. 用1X PBS洗涤细胞两次，并对样品进行成像或后续免疫染色处理。