搜索
搜索
新研博美

技术专栏

资讯分类
/
技术专栏

技术专栏

AF594 NHS ester试剂参数以及实验储备溶液的配置过程
AF594 NHS ester试剂参数以及实验储备溶液的配置过程
AF594 NHS ester染料被优化用于标记蛋白质,特别是抗体。AF594 NHS ester染料的荧光激发和发射zui大值分别为~590 nm和~610 nm。AF594 NHS ester家族从pH 3到11与ph无关。这些光谱特性使这种新的染料家族成为德克萨斯红®和AF594 NHS ester的一个极好的替代品。与TexasRed®相比,AF594 NHS ester更容易与RPE共轭,共轭率更高,得到的RPE-AF594 NHS ester串联具有更好的FRET效率。AF594 NHS ester SE相当稳定,对蛋白质氨基具有良好的反应活性和选择性。本文主要以山羊抗小鼠IgG与AF594 NHS ester SE的结合实验案例进行说明。
一、AF594 NHS ester 基本的数据
CAS号:1638544-48-5
英文名:AF594 NHS ester,AF594 NHS ester, 5-isomer,AF 594 Succinimidyl Ester
中文名:AF594 活性酯,AF594 NHS酯
分子式:C51H67N5O13S2
分子量:1022.23
纯度标准:95%+
外表颜色: 深蓝色晶体
结构式:



AF594 NHS ester结构式

 

存储条件:-20℃,阴凉,干燥,通风良好的库房
二、实验前储备溶液的制备:(所有未使用的原液应分为一次性等分,并在制备后以-20°C保存。避免反复的冻融循环)
1.蛋白质原液(溶液A)
将100µL反应缓冲液(如1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液,pH ~9.0)与900µL目标蛋白质溶液(如抗体,蛋白质浓度>2 mg/mL)混合,得到1 mL蛋白质标记原液。
注意事项:
a.蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整到8.0-9.0的范围。
b.蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中,pH值为7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH为7.2-7.4的1X PBS进行透析,以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。
c.缺损抗体或用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的抗体不能很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰偶联反应。叠氮化钠或硫柳汞可以通过透析或旋转柱去除,以获得最佳的标记结果。
d.蛋白质浓度小于2 mg/mL时,偶联效率显著降低。为了获得最佳的标记效率,推荐最终的蛋白浓度范围为2-10 mg/mL。
2.原液(溶液B)
iFluor™594 SE原液(溶液B)将无水DMSO加入到iFluor™594 SE的小瓶中,制成10 mM的原液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意事项:
在开始结合前准备染料原液(溶液B)。及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料的活性。溶液B可以在冰箱中保存两周。避免冻融循环。
三、样本实验方案
该标记方案是用于山羊抗小鼠IgG与iFluor™594 SE的结合。
1、运行共轭反应
A.以溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的10:1摩尔比为起点:将5µL染料溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(95µL溶液A)中,并有效摇晃。假设蛋白质浓度为10 mg/mL,蛋白质分子量为~200KD,蛋白质浓度为~0.05 mM。
B.在室温下继续旋转或摇晃反应混合物30-60分钟。



图1. HeLa细胞用(微管蛋白+)或不用(微管蛋白-)小鼠抗微管蛋白染色,然后用iFluor™594山羊抗小鼠IgG(左)或AlexaFluor®594山羊抗小鼠IgG(右)观察。
 

AF594是一种明亮的水溶性染料,对4到10范围内的pH变化不敏感,AF594可用于高摩尔染料-蛋白质比的蛋白质标记。由此产生的具有高度标记(DOL)的共轭物不会表现出明显的荧光猝灭,可以提高标记产物的检测限度。
陕西新研博美生物科技有限公司提供各种规格的荧光AF染料包括AF430,AF647,AF568,AF488等一系列的。对于荧光AF染料其是具有磺化基团的荧光物质。AF染料带负电荷,具有亲水性高、亮度高、光稳定性强、仪器相容性好、对pH不敏感等特点。AF染料的激发峰适用于激光光谱,发射峰较窄,抗猝灭性强,有利于多种荧光标记。
温馨提示:以上仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床或诊断,非药用,非食用。部分资料来源于网上,如有侵权,请立即联系我们进行删除。
MORE
AF594 NHS ester染料被优化用于标记蛋白质,特别是抗体。AF594 NHS ester染料的荧光激发和发射zui大值分别为~590 nm和~610 nm。AF594 NHS ester家族从pH 3到11与ph无关。这些光谱特性使这种新的染料家族成为德克萨斯红®和AF594 NHS ester的一个极好的替代品。与TexasRed®相比,AF594 NHS ester更容易与RPE共轭,共轭率更高,得到的RPE-AF594 NHS ester串联具有更好的FRET效率。AF594 NHS ester SE相当稳定,对蛋白质氨基具有良好的反应活性和选择性。本文主要以山羊抗小鼠IgG与AF594 NHS ester SE的结合实验案例进行说明。
一、AF594 NHS ester 基本的数据
CAS号:1638544-48-5
英文名:AF594 NHS ester,AF594 NHS ester, 5-isomer,AF 594 Succinimidyl Ester
中文名:AF594 活性酯,AF594 NHS酯
分子式:C51H67N5O13S2
分子量:1022.23
纯度标准:95%+
外表颜色: 深蓝色晶体
结构式:



AF594 NHS ester结构式

 

存储条件:-20℃,阴凉,干燥,通风良好的库房
二、实验前储备溶液的制备:(所有未使用的原液应分为一次性等分,并在制备后以-20°C保存。避免反复的冻融循环)
1.蛋白质原液(溶液A)
将100µL反应缓冲液(如1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液,pH ~9.0)与900µL目标蛋白质溶液(如抗体,蛋白质浓度>2 mg/mL)混合,得到1 mL蛋白质标记原液。
注意事项:
a.蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整到8.0-9.0的范围。
b.蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中,pH值为7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH为7.2-7.4的1X PBS进行透析,以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。
c.缺损抗体或用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的抗体不能很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰偶联反应。叠氮化钠或硫柳汞可以通过透析或旋转柱去除,以获得最佳的标记结果。
d.蛋白质浓度小于2 mg/mL时,偶联效率显著降低。为了获得最佳的标记效率,推荐最终的蛋白浓度范围为2-10 mg/mL。
2.原液(溶液B)
iFluor™594 SE原液(溶液B)将无水DMSO加入到iFluor™594 SE的小瓶中,制成10 mM的原液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意事项:
在开始结合前准备染料原液(溶液B)。及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料的活性。溶液B可以在冰箱中保存两周。避免冻融循环。
三、样本实验方案
该标记方案是用于山羊抗小鼠IgG与iFluor™594 SE的结合。
1、运行共轭反应
A.以溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的10:1摩尔比为起点:将5µL染料溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(95µL溶液A)中,并有效摇晃。假设蛋白质浓度为10 mg/mL,蛋白质分子量为~200KD,蛋白质浓度为~0.05 mM。
B.在室温下继续旋转或摇晃反应混合物30-60分钟。



图1. HeLa细胞用(微管蛋白+)或不用(微管蛋白-)小鼠抗微管蛋白染色,然后用iFluor™594山羊抗小鼠IgG(左)或AlexaFluor®594山羊抗小鼠IgG(右)观察。
 

AF594是一种明亮的水溶性染料,对4到10范围内的pH变化不敏感,AF594可用于高摩尔染料-蛋白质比的蛋白质标记。由此产生的具有高度标记(DOL)的共轭物不会表现出明显的荧光猝灭,可以提高标记产物的检测限度。
陕西新研博美生物科技有限公司提供各种规格的荧光AF染料包括AF430,AF647,AF568,AF488等一系列的。对于荧光AF染料其是具有磺化基团的荧光物质。AF染料带负电荷,具有亲水性高、亮度高、光稳定性强、仪器相容性好、对pH不敏感等特点。AF染料的激发峰适用于激光光谱,发射峰较窄,抗猝灭性强,有利于多种荧光标记。
温馨提示:以上仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床或诊断,非药用,非食用。部分资料来源于网上,如有侵权,请立即联系我们进行删除。
RGD分子影像在肺癌的研究现状与进展
RGD分子影像在肺癌的研究现状与进展
聚合物聚乙二醇PEG的应用介绍,一起来了解吧
聚合物聚乙二醇PEG的应用介绍,一起来了解吧
蛋白降解靶向嵌合分子(PROTAC)介绍及分子设计要素
蛋白降解靶向嵌合分子(PROTAC)介绍及分子设计要素
PROTAC 全称为 PROteolysis-TArgeting Chimeras (蛋白降解靶向嵌合分子),是一种杂合双功能小分子化合物,结构中含有两种不同配体,一个是泛素连接酶 E3 配体,另一个是与细胞中目标靶蛋白结合的配体,两个配体之间通过 linker 相连,从而形成 “ 三体 ” 聚合物——靶蛋白配体-Linker-E3 配体。
MORE
PROTAC 全称为 PROteolysis-TArgeting Chimeras (蛋白降解靶向嵌合分子),是一种杂合双功能小分子化合物,结构中含有两种不同配体,一个是泛素连接酶 E3 配体,另一个是与细胞中目标靶蛋白结合的配体,两个配体之间通过 linker 相连,从而形成 “ 三体 ” 聚合物——靶蛋白配体-Linker-E3 配体。
SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项
SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项
FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针保存方法及使用说明
FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针保存方法及使用说明
多学科交叉领域热门材料"多面手"PAMAM——树枝状聚合物
多学科交叉领域热门材料
PEG化蛋白药物、PEG化肽链型化合物、PEG化小分子药物、PEG化脂质体在药物修饰方面的应用
PEG化蛋白药物、PEG化肽链型化合物、PEG化小分子药物、PEG化脂质体在药物修饰方面的应用
PEG化蛋白药物,PEG化小分子药物,PEG化脂质体
134179-38-7,Azido-PEG3-amine,N3-PEG3-NH2的核磁图谱
134179-38-7,Azido-PEG3-amine,N3-PEG3-NH2的核磁图谱
N3-PEG3-NH2的结构式以及核磁图谱,陕西新研博美生物科技有限公司是国内业PEG供应商,可以提供不同分子量的PEG衍生物,小分子PEG的循环节可以做到1-36个
MORE
N3-PEG3-NH2的结构式以及核磁图谱,陕西新研博美生物科技有限公司是国内业PEG供应商,可以提供不同分子量的PEG衍生物,小分子PEG的循环节可以做到1-36个
新研博美BHQ-acid,BHQ-amine,BHQ-NHS荧光标记多肽
新研博美BHQ-acid,BHQ-amine,BHQ-NHS荧光标记多肽
BHQ-acid,BHQ-amine,BHQ-NHSBHQ-NHS,暗淬灭Black Hole Quencher(BHQ)可在整个可见光谱范围内和近红外范围内充当有效的深色猝灭剂,将其能量以热量而不是光的形式释放出来
MORE
BHQ-acid,BHQ-amine,BHQ-NHSBHQ-NHS,暗淬灭Black Hole Quencher(BHQ)可在整个可见光谱范围内和近红外范围内充当有效的深色猝灭剂,将其能量以热量而不是光的形式释放出来
上一页
1
2

CopyRight © 2020 陕西新研博美生物科技有限公司  ALL RIGHTS RESERVED

咨询热线:

 

13892832556   029-86217788

公司地址:陕西省西安市经济技术开发区

                 凤城九路79号

邮  箱:2440688701@qq.com