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• 发布时间：2022-11-29 17:58
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【概要描述】AF594 NHS ester染料被优化用于标记蛋白质，特别是抗体。AF594 NHS ester染料的荧光激发和发射zui大值分别为~590 nm和~610 nm。AF594 NHS ester家族从pH 3到11与ph无关。这些光谱特性使这种新的染料家族成为德克萨斯红®和AF594 NHS ester的一个极好的替代品。与TexasRed®相比，AF594 NHS ester更容易与RPE共轭，共轭率更高，得到的RPE-AF594 NHS ester串联具有更好的FRET效率。AF594 NHS ester SE相当稳定，对蛋白质氨基具有良好的反应活性和选择性。本文主要以山羊抗小鼠IgG与AF594 NHS ester SE的结合实验案例进行说明。 一、AF594 NHS ester 基本的数据 CAS号：1638544-48-5 英文名：AF594 NHS ester，AF594 NHS ester, 5-isomer，AF 594 Succinimidyl Ester 中文名：AF594 活性酯，AF594 NHS酯 分子式：C51H67N5O13S2 分子量：1022.23 纯度标准：95%+ 外表颜色: 深蓝色晶体 结构式： AF594 NHS ester结构式   存储条件：-20℃，阴凉，干燥，通风良好的库房 二、实验前储备溶液的制备:（所有未使用的原液应分为一次性等分，并在制备后以-20°C保存。避免反复的冻融循环） 1.蛋白质原液（溶液A） 将100µL反应缓冲液（如1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液，pH ~9.0）与900µL目标蛋白质溶液（如抗体，蛋白质浓度>2 mg/mL）混合，得到1 mL蛋白质标记原液。 注意事项： a.蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整到8.0-9.0的范围。 b.蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，pH值为7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH为7.2-7.4的1X PBS进行透析，以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）。 c.缺损抗体或用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不能很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰偶联反应。叠氮化钠或硫柳汞可以通过透析或旋转柱去除，以获得最佳的标记结果。 d.蛋白质浓度小于2 mg/mL时，偶联效率显著降低。为了获得最佳的标记效率，推荐最终的蛋白浓度范围为2-10 mg/mL。 2.原液（溶液B） iFluor™594 SE原液（溶液B）将无水DMSO加入到iFluor™594 SE的小瓶中，制成10 mM的原液。通过移液或涡旋混合均匀。 注意事项： 在开始结合前准备染料原液（溶液B）。及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料的活性。溶液B可以在冰箱中保存两周。避免冻融循环。 三、样本实验方案 该标记方案是用于山羊抗小鼠IgG与iFluor™594 SE的结合。 1、运行共轭反应 A.以溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的10：1摩尔比为起点：将5µL染料溶液（溶液B）加入到蛋白质溶液(95µL溶液A）中，并有效摇晃。假设蛋白质浓度为10 mg/mL，蛋白质分子量为~200KD，蛋白质浓度为~0.05 mM。 B.在室温下继续旋转或摇晃反应混合物30-60分钟。 图1. HeLa细胞用（微管蛋白+）或不用（微管蛋白-）小鼠抗微管蛋白染色，然后用iFluor™594山羊抗小鼠IgG（左）或AlexaFluor®594山羊抗小鼠IgG（右）观察。   AF594是一种明亮的水溶性染料，对4到10范围内的pH变化不敏感，AF594可用于高摩尔染料-蛋白质比的蛋白质标记。由此产生的具有高度标记（DOL）的共轭物不会表现出明显的荧光猝灭，可以提高标记产物的检测限度。 陕西新研博美生物科技有限公司提供各种规格的荧光AF染料包括AF430，AF647，AF568，AF488等一系列的。对于荧光AF染料其是具有磺化基团的荧光物质。AF染料带负电荷，具有亲水性高、亮度高、光稳定性强、仪器相容性好、对pH不敏感等特点。AF染料的激发峰适用于激光光谱，发射峰较窄，抗猝灭性强，有利于多种荧光标记。 温馨提示：以上仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床或诊断，非药用，非食用。部分资料来源于网上，如有侵权，请立即联系我们进行删除。