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SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项

SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项

  • 分类:技术专栏
  • 作者:新研博美
  • 来源:http://www.xinyanbm.com/
  • 发布时间:2022-05-31 15:50
  • 访问量:

【概要描述】

SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针产品特性及使用注意事项

【概要描述】

  • 分类:技术专栏
  • 作者:新研博美
  • 来源:http://www.xinyanbm.com/
  • 发布时间:2022-05-31 15:50
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SBFI AM ( Na+ Indicator) 钠离子指示探针

一、产品描述
SBFI,英文全名Sodium-binding Benzofuran Isophthalate,一种Na+选择性荧光指示剂,可用来预测纯化线粒体Na+梯度,检测胞内Na +水平,测定细胞Na+外流,以及与其他荧光指示剂联合使用以分析Na+与Ca2+和Mg2+浓度、胞内pH和膜电位变化的相关性。虽然SBFI对Na+的选择能力弱于Ca2+指示剂比如Fura-2,但在其他单价阳离子存在体系,SBFI足以检测Na+的生理浓度。结合离子后的SBFI光谱反应可通 过激发光比率测定来判定,其能与用相同光滤片和仪器检测的探针Fura-2共同使用。当体系内含生理浓度的K+/Na+(~135mM),SBFI对Na+的解离常数(Kd)为11.3mM;而不存在K+体系,对Na+的Kd为3.8mM。SBFI 对Na+的选择性比K+约强18倍。
本品为乙酰氧基甲基酯(Acetoxymethyl ester, AM ester)形式的SBFI,CAS NO:129423-53-6,具有细胞膜渗透性,只需简单孵育即可进 入细胞,常用加载浓度范围5-10µM,加载时间40min-4h,根据具体的实验要求和细胞类型来调整。
二、产品特性
1)化学名:4,4’-[1,4,10-trioxa-7,13-diazacyclopentadecane-7,13-diylbis(5-methoxy-6,2-benzofurandiyl)]bis-1,3- benzenedicarbox ylic acid 1,1’,3,3’-tetrakis[(acetyloxy)methyl] ester
2)同义名:Sodium-binding Benzofuran Isophthalate Acetoxymethyl ester
3)CAS NO:129423-53-6
4)分子式:C56H58N2O23
5)分子量:1127.07
6)纯度:>90%(HPLC)
7)Ex/Em:340,380/500 nm
8)外观:浅黄至暗黄至暗橙固体或油状
9)溶解性:溶于DMSO(10mM)
10)化学结构式:


三、保存与运输方法
保存:-20℃避光干燥稳定冻存二年。 运输:冰袋运输。
四、注意事项
1)SBFI AM易受潮,粉末需要干燥保存;需用无水DMSO溶解,配制储存液(如10mM),置于-20℃干燥避光,小量分装避免反复冻融,至 少3个月稳定。
2)由于SBFI AM水溶性较差,可在实验前与等体积Pluronic F-127(25% w/v)混合,以提高探针加载效率。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
五、SBFIAM(Na+ Indicator)使用和注意事项
以下步骤仅做参考,具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。
1)配置1-10mM SBFI AM储存液∶比如,实验前取一管50ug SBFI AM置于室温回温至少20min,低速离心后,往管内加入8.8723ul无水DMSO使其充分溶解后,制备成5mM储存液。若单次用不完,需分装冻存。
2)准备25%(w/v)Pluronic F-127∶100mg Pluronic F-127粉末中加入 400μl DMSO,配制成25%(w/v)DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。【也可配置成其他浓度Pluronic F-127,只需保证最终工作体系内 Pluronic F-127<0.1%(w/v)】。
3)于正式实验前,将 SBFI AM 储存液于等体积25%(wv)Pluronic F-127混匀。【注意∶SBFIAM水溶性差,必须借助 Pluronic F-127来促进其分散进入水溶性加载缓冲液。两者只能在实验前混匀,不能保存待用】。
4)将上述混合液加入适量细胞加载缓冲液(如生理缓冲液PBS,无血清细胞培养基等)达到所需的工作浓度,加入细胞内进行探针标记。孵育温度可以是室温或37℃,孵育浓度通常为5-10μM,时间40min-4h,具体的孵育浓度和时间请参考相关的文献资料。
5)孵育结束,再加入不含探针的细胞加载缓冲液额外孵育 20-60min,以保证细胞将 SBFI AM完全酯酶化。
6)最后用生理缓冲液或无血清培养基清洗细胞至少一次,以降低胞外背景荧光。
7)用合适的仪器检测荧光信号,分别收集激发波长 340nm,380nm,发射波长500nm(发射波长范围450-550nm,根据你的实际荧光信号看看最大波长吸收峰大概在哪个位置)。根据双激发波长收集荧光信号的比值来确定离子浓度。
【注意事项】∶
1)如果细胞加载缓冲液是以碳酸氢钠为缓冲体系,那么加载需要含5%CO2的环境内进行,以防止因CO2损失引起的缓冲液碱化。
2)如果细胞加载缓冲液含血清,那需适当提高 AM探针工作浓度,以补偿因 AM探针与血清蛋白结合引起的损失。
3)某些情况下,对分子量接近或超过1000的 AM探针,需用不含 AM探针的细胞加载缓冲液进一步孵育 20-60min,以保证细胞内酯酶能充分降解 AM基团。
4)探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异,请使用前参考相应的文献资料来设计和摸索最佳条件。
5)探针的细胞 Kd值与溶液 Kd值有差异,SBFI的胞内Kd值可用通道形成抗生素如gramicidin来校准(calibration)。根据具体实验要求来决定是否做这一步。
可查阅文献∶a)Negulescu PA et al. Intracellular ion activities and membrane transport in parietal cells measured with fluorescent dyes. Methods Enzymol. 1990;192:38-81.
b)Harootunian et al,Ratio imaging using a newly developed Fluorescent sodium indicator in rat fibroblasts. FASEBJ2:A728(1988).
c)Harootunian et al. Fluorescent ratio imaging of cytosolic free Na+ in fibroblasts and lymphocytes Journal of Biological Chemistry 1989.
 

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