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FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针保存方法及使用说明

FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针保存方法及使用说明

  • 分类:技术专栏
  • 作者:新研博美
  • 来源:http://www.xinyanbm.com/
  • 发布时间:2022-05-30 14:30
  • 访问量:

【概要描述】

FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针保存方法及使用说明

【概要描述】

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  • 作者:新研博美
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FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针

一、产品简介:
FeRhoNox-1,也称为RhoNox-1,是一种活跃的荧光探针,特异性检测不稳定的铁(II)离子(Fe2+)。一旦与Fe2+反应后,不可逆的生成一种橙色(红色)荧光产物(Absmax=540nm,FLmax=575nm,图1.FeRhoNox-1的光谱特征)。生理浓度下的铁(III)离子(Fe3+)或其它除铁离子以外的二价金属离子都不会使其荧光增强(见图2FeRhoNox-1的选择性).FeRhoNox-1的反应特异性)。FeRhoNox-1具细胞膜渗透性和高选择性,适用于活细胞内Fe2+的检测,倾向定位在高尔基体。

1. FeRhoNox-1的光谱特征。FeRhoNox-1与Fe2+反应后吸收和发射光谱(上)。FeRhoNox-1在37℃,与Fe2+反应1h后,荧光明显增强。最大荧光峰约在575nm。

2. FeRhoNox-1的选择性。FeRhoNox-1仅与Fe2+反应。

 

保存及运输-20℃避光干燥保存,至少1年有效。运输:冰袋运输。

 

二、操作步骤

1.需要自行准备的材料

1.1细胞培养级或超纯DMSO(CAT:#FS0306)【强烈建议将高纯的DMSO分装成单次用量保存在极低温冷冻室内,比如-80℃,避免吸潮。降解的DMSO可能会增加FeRhoNox-1的背景信号】

1.2合适的清洗和观察缓冲液(比如:PBS, pH 7.4;HBSS;等)。[注意]不要含有酚红。

2.探针准备

2.1从冰箱取出FeRhoNox-1,置于室温回温至少30min,将其置于微量离心机内低速离心。将瓶内的粉末离心到管底后,再开盖。

2.2往一管FeRhoNox-1(50μg)内加入109μl高质量DMSO,用枪反复吹吸5次或以上,使其完全溶解即得到1mMFeRhoNox-1储存液。建议单次用完储存液,若实在用不完,请根据单次用量分装,置于-80℃避光保存。用中性缓冲液来稀释储存液。

2.3于正式实验前,用HBSS或其他中性缓冲液来稀释1mMFeRhoNox-1储存液到所需工作浓度(比如:5μM),工作液需现配现用,尽快用完。

3.染色步骤
3.1从玻璃底培养皿上培养的细胞中吸掉培养液。
3.2吸掉上清液,用 HBSS 清洗细胞 2 次。
3.3加入含5μM  FeRhoNox-1的染色工作液,于37℃,5%CO2培养箱中孵育60min。
3.4在荧光显微镜下观察细胞。

4.荧光检测

对于荧光激发:通用的绿色激发滤片比如Cy3或四甲基罗丹明(TMR)检测用的滤片。

对于激光激发:532nm或543nm激光器比较适合。发射波长为570nm左右。

注意事项

1)FeRhoNox-1倾向定位在高尔基体,但也可能检测细胞质池内的Fe2+,目前针对这一点未做明确评估。

2)酸性溶液会氧化FeRhoNox-1,严重影响探针的效率。

3)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

附录F eRhoNox-1的染色示例

I. HepG2细胞 图3. FeRhoNox-1在HepG2活细胞内的成像检测。①-Fe(II):细胞未添加亚铁离子(100μM硫酸亚铁铵);②+Fe(II):细胞加载亚铁离子;③+Fe(II)+Bpy:细胞加载亚铁离子,之后用加入铁离子螯合剂Bpy。图②荧光增强,而图③荧光降低。此结果与FeRhoNox-1特异性检测Fe(II)的特征一致。

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